世界上第一台高分辨熔解曲线基因突变检测/分型系统 (Hi-Res Melting, HRM)

Light Scanner 高分辨熔解曲线基因突变/基因分型检测系统是美国Idaho公司专利的世界上第一台专门用于快速基因突变扫描和基因分型的高通量检测系统，5分钟即可完成96/384孔板PCR产物样品突变检测，尤其用于测序前的大规模突变筛查及基因分型工作，使测序的工作量降低为原来的1%。此外LightScanner还可以检测到体细胞样品中比例低至0.1%的突变，特别适用于Cancer及流行病学大规模筛查。商品化的HRM仪器分为LightScanner 96（96孔）、LightScanner 384（384孔）和 HR-1（单通道）三种型号，分别设计适用于不同样品通量的实验室需求。其中HR-1单通道HRM仪器配合Idaho公司的Rapid Cycler 2快速PCR仪使用，能发挥HR-1更优异性能。利用该技术分析时不消耗被测PCR产物样品，分析结束后PCR产物可用于下游的分析，如测序等。

理想的SNP检测手段：
快速、高通量—LightScanner 5分钟完成96/384孔板的PCR产物检测， 20000个SNP/天
准确、灵敏度高、特异性好—LightScanner100%准确性、特异性（<400bp）；准确性96.4%和特异性99.1%（400~1kb）
重复性好—LightScanner重复性100%
费用低—LightScanner检测SNP每个样品的成本为1RMB
操作简便—LightScanner只需将PCR产物（96/384孔板）放入仪器内便可，10ulPCR产物即可，不需要条件优化，软件自动基因分型

关于HRM技术的特点

• PCR反应前加入饱和LC Green Plus荧光染料，PCR产物直接分析（Close Tube）
• 检测片段范围50bp~1000bp
• 96孔板或者384孔板模式
• 5分钟内完成96/384孔板样品数据采集
• 直接未知杂合突变鉴定准确性100%，特异性100%
• 直接未知 纯合突变鉴定准确性96%
• 利用非标记探针快速基因分型法直接未知纯合子鉴定准确性100%
• 肿瘤研究中低突变率样品基因突变检测，最低检测到0.1%的突变样品基因突变
• 甲基化样品甲基化程度检测、分型
• 单个样品运行费用低于目前市场上任何商品化的基因突变检测仪器，如变性HPLC
• 只检测PCR样品中荧光强度的变化，不消耗任何PCR样品，无污染，PCR产物可以进行下游分析
• 专利的荧光染料技术，专利的高分辨PCR产物溶解曲线基因突变检测（Utah University）技术

LightScanner广泛用于：
1．样本中特定突变位点SNP（包括缺失、重复）的筛查。基因突变扫描。
2. 疾病相关基因（癌基因）特定区段突变位点的扫描，新突变的发现。
3. 遗传育种中特定突变的筛查、未知突变的发现。
4．HLA基因组配型、等位基因频率分析、物种鉴定、品种鉴定、甲基化研究。
5．法医学鉴定、亲子鉴定。
6. 动植物品质相关多态性位点的研究等。植物抗逆性，突变与性状关联性的研究。

HRM 原理：在PCR反应前将LC Green荧光染料与反应Buffer、引物、模版DNA混合，LC Green染料饱和加入（LC Green荧光染料对PCR不会有任何抑制作用），然后将PCR产物（96孔板或者384孔板）直接放入LightScanner或HR-1仪器中，在一定的温度范围内将PCR扩增产物进行变性，在此期间，仪器的光学检测系统采集密集的荧光信号变化并绘制温度熔解曲线，根据曲线准确区分野生型、杂合突变、纯和突变，软件自动分型。 LightScanner为高通量、高分辨率、高灵敏度检测手段，检测成本及低，通过上述检测分型之后，只有约1%的PCR产物需要测序，因此极大的降低了测序的工作量，节省费用。 如下图：